Korak 1: Raztopite surovi peptid Melanotan I v 100 mL prečiščene vode in filtrirajte zmes skozi 0,45 μm membrano, da dobite raztopino surovega peptida.
2. korak: Očistite surovi peptid Melanotan I s tekočinsko kromatografijo visoke-zmogljivosti (HPLC). Uporabite dinamično aksialno kompresijsko kolono DAC-HB50 s postopkom gradientne elucije z uporabo mobilne faze A (0,05 mas. % trifluoroocetne kisline v vodi) in mobilne faze B (0,05 mas. % trifluoroocetne kisline v acetonitrilu). Vzorec spremljajte z UV detektorjem in zberite raztopino peptida, ki ustreza ciljnemu vrhu v frakcijah.
Korak 3: Po čiščenju s HPLC pridobite 180 mL raztopine trifluoroacetata Melanotan I s čistočo nad 99 %; to koncentriramo z rotacijskim izparevanjem, da dobimo 50 mL raztopine.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >99 % čistost). Eluirajte 50 minut z 2 % vodnim sistemom ocetne kisline. Koncentrirajte zbrani ciljni produkt na 80 mL z rotacijskim izparevanjem, nato pa ga izpostavite postopkom pred-liofilizacije in liofilizacije. Končno pridobimo 5,33 g peptida melanotan I visoke-čistosti, kar predstavlja izkoristek 32,33 %.